二氢叶酸还原酶（dihydrofolate reductase）利用NADPH还原二氢叶酸产生四氢叶酸的氧化还原酶。

EC1.5.1.3.。存在于微生物和肝脏中的二氢叶酸还原酶曾有所细致的研究。分子量约为2万。似乎也有催化叶酸使之还原成二氢叶酸的作用，所以可将叶酸成为该酶辅酶的活性型的四氢叶酸。在核酸合成旺盛的白血病患者的白细胞中含量很多，而其抗癌药氨[基]蝶呤（4-氨基蝶[基]谷氨酸）等的作用机理，可能是因为在低浓度（10-8M）下可抑制此酶而抑制核酸的合成。