马三娘是动画片《
虹猫蓝兔七侠传》及其外传《
虹猫蓝兔阿木星》中的反派角色。马三娘在片中以马的形象出场，师承雪岛派，武器蛇形剑，且学有
千手观音、分筋错骨手等绝招。
马三娘是魔教安插在七剑中的卧底，她的主要任务是冒充紫云剑主，促成七剑合璧，使
麒麟现身。马三娘学会紫云剑法后没有提升实力。她的真心并不想给予黑虎父子麒麟，而是想借七剑合璧除掉魔教后，七剑传人非伤即残之机，除掉七剑、得到麒麟。她多次陷害紫云剑主，致使紫云剑主右手残废。马三娘的阴谋被
武当七侠识破且将计就计，最终七剑合璧后被紫云剑主
莎丽刺死。
马三娘身为一名反派，她蛇蝎心肠，坚定自己反派的立场，从不受
虹猫等正派人士影响，同时，也不甘心给野心勃勃的
黑心虎当工具人。 为了完成任务，就算是真队友，她也能痛下杀手。即使正面打不过，还可以用
暗器、用药、用毒，无所不用其极。而对待莎丽时，更是出手狠辣，拷问、毒药、
催眠统统都安排上。
马三娘的伪装毫无破绽，不仅蒙骗住任务目标，甚至还能唬住队友。 她变脸迅速，声线切换自如，在任务目标（虹猫等）面前，是正直的好伙伴。在魔教教主黑心虎手下，则是忠心耿耿的部下。在真正的队友（
猪无戒）面前亦机智勇敢，站住立场。
马三娘学习能力超强，为了取代莎丽，她潜伏许久，暗中观察学习，苦练紫云剑法第九重，最后还学成了。且马三娘不只是学习莎丽的功夫，就连莎丽住的房子也摸透彻了。在与主角团正面初见时，更是秉承着七剑的宗旨，为更好地隐瞒身份，拆起家来毫不心慈手软。
在虹猫寻找第三剑莎丽之前，马三娘与莎丽比武，企图将莎丽置于死地。但由于莎丽掌握着紫云剑的秘密，马三娘只好让她记忆全失，变成痴呆的哑女。马三娘苦练紫云剑法，直到完全掌握紫云剑的秘密。她计划在得知所有秘密后杀掉莎丽，但被虹猫发现并揭露了真相。
虹猫巧妙地让马三娘相信莎丽是魔教的卧底，使得马三娘将莎丽关在宝塔山。在虹猫的精心策划下，莎丽最终被救出。马三娘误以为莎丽已死，便放心地继续策划她的阴谋。然而，活着的莎丽虽然中了剧毒，但在逗逗的治疗下右手残废了。马三娘继续代替紫云剑主的身份，直到七剑合璧杀死了黑心虎，马三娘露出原形，企图杀掉七剑，得到麒麟。这时，莎丽出现，将马三娘刺死。
在一次雷雨之夜，马三娘凭借雪岛至宝雪珠的力量复活，她想到了自己的儿子阿木，便回到雪岛去。在得知阿木第三只眼的秘密后，为了复仇和得到麒麟，她毒死了自己的师父雪岛上人，并利用阿木渴望寻母的心理，骗取了四兽内丹。
当阿木得知杀害雪岛上人的是自己的生母马三娘时，他痛苦不已。马三娘为了控制阿木，甚至使用毒品。虹猫蓝兔前来阻挡她的阴谋，但她在背后教唆、分化，让阿木与虹猫为敌。最终，马三娘意识到阿木是自己的亲生儿子，感到非常痛苦，一度想要寻死，但为了复仇，她不得不牺牲自己的儿子。尽管她内心深处仍然爱着阿木，但她无法控制自己的邪念。
阿木在得知真相后，决定把内丹归还并化作星星，任何邪恶的力量都无法逃脱。马三娘最后失去了儿子，只能终日隐居在山林中，躲在阴暗的角落里度过余生。
2006年9月5日在中央电视台少儿频道的《
动画乐翻天》节目开播，全108集。 该电视动画荣获2006年少儿节目及动画精品国产动画片
一等奖、2010年第六届
中国国际动漫游戏博览会最佳电视动画大奖。
别名《马三娘外传》，是《虹猫蓝兔七侠传》的续作，由
湖南宏梦卡通传播有限公司在2007年制作的的一部武侠动画片，全30集。该电视动画荣获2008年年度全国少儿节目精品及动画精品评审——优秀国产电视动画片鼓励奖。
豆瓣网评：这个反派没有遗言。马三娘野心勃勃，一心想做
黄雀，在替代紫云剑主时更显其恶毒与阴险，不想反成为七剑的瓮中鳖。马三娘作为女性角色，参与角逐称霸武林，也是非常有魄力和胆识的。她的悲剧在于身后空无一人。她永远是一个人在战斗，无论是魔教还是在卧底时。所以，她永远不可能赢。