DAPI即4',6-二基-2-苯基吲哚（4',6-diamidino-2-phenylindole），是一种能够与脱氧核糖核酸强力结合的荧光染料，常用于荧光显微镜观测。因为DAPI可以透过完整的细胞膜，它可以用于活细胞和固定细胞的染色。DAPI能快速进入活细胞中与DNA结合，因此DAPI对生物体而言，也被视为一种毒性物质与致癌物，使用过程中应注意操作与抛弃的处理程序。

在荧光显微镜观察下，DAPI染料是利用紫外光波长的光线激发。当DAPI与双股DNA结合时，最大吸收波长为358nm，最大发射波长为461nm，其发散光的波长范围含盖了蓝色至青绿色。DAPI也可以和核糖核酸结合，但产生的荧光强度不及与脱氧核糖核酸结合的结果，其发散光的波长范围约在500nm左右。

DAPI的发散光为蓝色，且DAPI和绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein, GFP)或Texas 红色染剂(红色荧光染剂)的发散波长，仅有少部分重叠，研究员可以善用这项特性在单一的样品上进行多重荧光染色。

DAPI

中文名：4，6-联脒-2-苯基吲(?)

英文名：4',6-diamidino-2-phenylindole，2-(4-amidinophenyl)-1H -indole-6-carboxamidine，DAPI dihydrochloride

CAS number：28718-90-3

光谱性质： DAPI的最大激发波长为340nm，最大发射波长为488nm

与双链脱氧核糖核酸结合时最大吸收/最大发射为358 nm/461 nm；与核糖核酸结合时，最大发射移动到400 nm左右。

染色原理：

DAPI 为一种荧光染料，可以穿透细胞膜与细胞核中的双链DNA结合而发挥标记的作用，可以产生比DAPI自身强20多倍的荧光，和EB相比，对双链DNA的染色灵敏度要高很多倍。显微镜下可以看到显蓝色荧光的细胞，荧光显微镜观察细胞标记的效率高(几乎为100 %) ，且对活细胞无毒副作用。DAPI染色常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。DAPI也常用于普通的细胞核染色以及某些特定情况下的双链脱氧核糖核酸染色。细胞经热激处理后用DAPI染色3分钟，在荧光显微镜下可以看到到细胞核的形态变化。

a、正常的烟草细胞核：核形完整，染色质均匀。

b、染色质固缩，向外周聚集，形成周边化。

c、染色质进一步固缩，形成很多颗粒物质。

d、细胞核破裂形成碎片，核解体。

在细胞移植前，将DAPI 以一定的浓度加入培养基中，与细胞共同孵育过夜，用PBS 缓冲液漂洗至少6 次以洗掉未结合的DAPI，在用酶消化后离心收集细胞，加入DMEM 培养基制成细胞悬液以备用。

存储条件：-20℃避光保存

每次使用，用量较少，可反复冻融，无需分装

注意事项：

1、DAPI强烈致癌，操作时要戴上手套。

2、贮存液用70%乙醇配制，浓度100 µg/ml，可用黑纸包住，长期冻存。使用液按1:1000用pbs稀释，最终浓度100 ng/ml。

3、DAPI是非常优秀的脱氧核糖核酸染料，固定过和没有固定过的活细胞均可用DAPI染色。

1971年DAPI在一项关于制抗非洲锥虫病的药物的研究中第一次被合成于OttoDann的实验室。它虽然不是一种成功的药物，但更深入的研究表明它与DNA强力结合并在此时发出更强的荧光，这导致了1975年它被用在超速离心分析法中以标记线粒体DNA。与DNA结合时激发的强荧光使它被广泛用于荧光显微镜技术中对DNA的染色。上世纪70年代末证实DAPI可以被用来在植物，微生物，多细胞动物和细菌细胞中追踪脱氧核糖核酸，1977年证实它可以被用来定量给细胞中的DNA染色，同时也证实DAPI可在流式细胞术中用作DNA染料。

当DAPI与双股DNA结合时,在荧光显微镜观察下，DAPI染剂在358nm(紫外线)处有一个最大吸收峰，并在461nm(蓝)处有一个最大发射峰，其发射光的波长范围含盖了蓝色至青绿色，因此在荧光显微技术中DAPI被紫外线照亮且被蓝或青色滤镜检出。DAPI也可以和核糖核酸结合，但产生的荧光强度不及与脱氧核糖核酸结合的结果，其发射光的波长范围约在400nm左右。

DAPI可用于固定细胞染色，但是因为活细胞染色对DAPI浓度有严格要求，它很少被用于活细胞染色。DAPI能快速进入活细胞中与DNA结合，因此DAPI对生物体而言，也被视为一种毒性物质与致癌物。然而在MSDS中它被标记为无毒。尽管DAPI没有显现出对E.coli的诱变性，它在机器制造商提供的信息上被认为是一种DNA诱变剂。由于DAPI可以掺入脱氧核糖核酸螺旋中，它很有可能有底层的DNA诱变性，因此应小心配置和使用DAPI。

类似于DAPI技术，赫斯特染色是一种既可以用于活细胞也可以用于固定细胞的蓝色荧光染料，并且可以使用与DAPI相同的机器滤镜设置。