酶联免疫测定（Enzyme-Linked Immunoassay, EIA）是一种常用的生物分析技术，它以酶作为标记物，具有特异性、灵敏度、简易性和快速等特点，在生物医学研究和临床疾病诊断中广泛应用。
技术特点
EIA技术相较于放射免疫测定（Radioimmunoassay, RIA），具有试剂半衰期长、环境友好以及废弃物易处理的优势。然而，EIA的检测灵敏度通常低于RIA。为了提升EIA的检测灵敏度，研究人员开发了多种EIA测定放大系统，使得EIA的灵敏度能够媲美甚至超过RIA。
放大原理
EIA的技术核心在于利用酶作为标记物，因此，EIA的放大策略主要集中在标记酶的增强方面。主要有以下三种途径：
1. 增加标记酶的数量
通过生物素/亲和素-酶或酶/抗酶复合物的间接方法，可以在ELISA测定过程中显著增加最终测量的标记酶数量。尽管这种方法能在一定程度上提高EIA的灵敏度，但也可能导致非特异性背景显色的增加。
2. 应用非显色底物
采用具有高灵敏度的非显色底物，如荧光素或发光物质，能有效提高EIA的灵敏度。这种方法无需额外的步骤和试剂制备，但需要特定的检测仪器。
3. 添加受标记酶催化的反应系统
通过添加受标记酶催化的反应系统，如酶底物反应循环或酶级联反应，实现反应的放大。这些多步催化反应的耦合构成了酶放大的基础，提高了灵敏度，而非简单的分子转化。选择合适的酶放大系统时，除考虑生化因素外，还应注重酶及其底物的稳定性和易得性，这对实验的准确性与重复性至关重要。