核酸杂交技术
核酸杂交技术
核酸杂交技术是分子生物学的一种标准技术,主要用于检测脱氧核糖核酸核糖核酸分子中的特定序列。
技术原理
核酸杂交技术的基本过程包括将DNA或RNA转移至硝化纤维素或尼龙膜上,并使用放射性或非放射性标记的单链DNA或RNA探针进行杂交。在杂交过程中,探针通过氢键与目标序列相结合,随后去除未结合的自由探针,最终通过放射自显影或显色反应来检测特异性结合的探针。
分类及方法
DNA印迹杂交
DNA印迹杂交分为两种方法:一是将DNA或RNA溶液直接点样于硝酸纤维素膜或尼龙膜上;二是利用琼脂糖凝胶电泳脱氧核糖核酸核糖核酸片段转移到膜上,其中DNA在电泳前会经过限制性内切酶的处理。
RNA印迹杂交
斑点杂交
斑点杂交是指将少量核酸样品点样在硝化纤维素滤膜上,然后在80℃下烘焙以确保样品牢固地固定在膜上。接下来,使用探针进行杂交。尼龙膜,尤其是聚偏二氟乙烯(PVDF),具有更高的DNA结合能力,且坚固易操作。点样的方法可以手动完成,也可以使用自动点样设备。检测时,可以选择放射性探针进行自显影或者使用非放射性探针进行显色。
原位杂交
原位杂交是在保持细胞形态的情况下,在细胞内部进行杂交。这种方法适用于对脱氧核糖核酸核糖核酸的分析。荧光原位杂交(FISH)特别适合用于染色体DNA的分析,它不仅可以应用于细胞分裂中期,还可以在分裂间期核中诊断染色体的变化。
参考资料
核酸杂交技术.知乎.2024-11-04
硝酸纤维素.方都化工网.2024-11-04
DNA印迹杂交.文库.2024-11-04
目录
概述
技术原理
分类及方法
DNA印迹杂交
RNA印迹杂交
斑点杂交
原位杂交
参考资料