秀丽隐杆
线虫(C.elegans)是一种常见的、自由生活的小型土壤线虫,属于小杆哑纲(Rhabditia)、
杆状线虫目(Rhabdit-idia)、小杆总科(Rhabditoidea)。
秀丽隐杆线虫以细菌为食,其呈
植物病原线虫状、成体长约1.0~1.5mm,身体直径约70.0μm。秀丽隐杆线虫为两侧对称,体表有一层角质层覆盖物,无分节,有4条主要的表皮索状组织及1个充满
体液的
假体腔。其
雌雄同体个体仅有302个
神经元,
雄性有385个神经元,但却具有睡眠、学习、记忆等复杂行为。
线虫个体
细胞发育差异小,因此基于个体的研究也有普适性。由于以上性质,秀丽隐杆线虫是目前
神经科学研究中极为重要的
模式生物之一。
雌雄同体成虫有959个体细胞,雄虫有1031个体细胞。最常见的雌雄同体成虫成熟后含有959个体细胞和2000个
配子,而较少见的雄性成虫则只有1031个体细胞和1000个生殖细胞。基本解剖构造包括1个口、咽、肠、性腺及
胶原蛋白角质层。
雄性虫体有1个单叶性腺,输精管及1个特化为
配种用的尾部。
雌雄同体有2个
卵巢、输卵管、藏精器及单一
子宫。雌雄同体虫可
产卵约300个,卵孵出
美国白灯蛾,卵孵化后经4龄期幼虫阶段以后生长为成体。区分幼虫期以蜕皮为标志,同时
线虫随龄期、大小也有所差异。在 20℃下,秀丽隐杆线虫平均寿命为2~3周,而发育一个世代仅需4天左右的时间。
生物学特征
形态特征
秀丽隠杆线虫的形态为
植物病原线虫状、两侧对称,体表有一层角质层覆盖物,无分节,有四条主要的表皮索状组织(epidermal cord)及一个充满
体液的
假体腔(pseudocoelom)。这一科的成员大都有与其他动物相同的器官组织。
秀丽隠杆线虫有
雄性及
雌雄同体两种性别,其基本解剖构造包括一个口、咽、肠、性腺,及
胶原蛋白角质层。雄性有个单叶的性腺、输精管及一个特化为
交配用的尾部。雌雄同体有两个
卵巢、输卵管、藏精器,及单一的一个
子宫。
细胞学特性
从研究的角度来看,秀丽隠杆
线虫的优势在于为一种多细胞
真核生物,又够简单到可以被详细研究。秀丽隠杆线虫每一个体
细胞(雌雄同体成虫有959个;雄成虫有1031个)的发展命运都已被确立。这个细胞世系的规律在各个个体之间是几乎不变的。两种性别的个体,都有许多多出的细胞(
雌雄同体131个,大部分原本将成为
神经元)会经由细胞凋亡的过程被除去。
野生型秀丽隠杆线虫雌雄同体,每一细胞之
细胞核均被染色显示。除此之外,秀丽隠杆线虫还是
神经系统最简单的生物之一。在
双性同体中,总共有302个神经元,其连结形式也已完全被建立出来,且被证实为一小世界网络。更多研究探索了与秀丽隠杆
线虫的一些特殊行为有密切关连的神经机制,包括化学趋向性、
趋温性,以及
雄性交配行为。
2002年,
诺贝尔生理学或医学奖颁发给了
西德尼·布伦纳与H. Robert Horvitz和John Sulston,以表扬他们对了解秀丽隠杆线虫
细胞死亡程序及器官发育
遗传学的贡献。
生命周期
秀丽隠杆线虫基本的生命周期如下:秀丽隠杆线虫由
雌雄同体产下卵。卵在孵化后,会经历四个
美国白灯蛾期(L1-L4)。当
族群拥挤或食物不足时,秀丽隠杆
线虫会进入另一种幼虫期,叫做dauer幼虫。Dauer能对抗逆境,而且不会老化。雌雄同体在L4期生产精子、并在成虫期
产卵。
雄性能使雌雄同体
受精卵;雌雄同体会优先选择雄性的精子。
秀丽隠杆线虫在实验室中20°C的情况下,平均寿命约为二、三周,而发育时间只须几天。
胚胎期
胚胎发生可以大致分成两个时期:增殖期和器官与型态形成期。在增值期受精卵会从一个
细胞逐渐增殖成大约550个必要的未分化细胞,而增殖期又可以分为两个阶段,其中一个阶段是在母体内进行(在22°C的生长环境下约为受精后0-150分钟),这个阶段分裂出较少的创始者细胞,在增殖期结束时,胚胎形成一个含有三
胚层的球型构造,这三个胚层分别是外胚层(之后分化生成
皮下组织和
神经系统)、
中胚层(未来产生咽部和
肌肉系统)和
内胚层(以后生成
生殖腺和肠道)。而另一个阶段则进行大量的
细胞分裂和
原肠形成(在22°C的生长环境下约为
受精卵后150-350分钟),这个阶段持续到
胚胎进入器官与型态形成期。
型态形成期
在22°C的生长环境下约为受精后的5.5-5.6小时到12-14小时,胚胎会增长约三倍并形成完全分化的组织和器官,根据胚胎内观察到的虫体折叠数可以分为comma stage、1.5折叠期、2折叠期、3折叠期以及4折叠期。第一次的肌肉抽动在受精后430分钟可以被观察到(约为1.5折叠或2折叠期);而在受精后约510分钟不同性别可以观察到发育差异(雌雄间性胚胎的头部伴护神经(cephalic companion neurons)死亡,
雄性胚胎的雌雄间性特有神经(
双性同体specific neurons)死亡),而在3折叠期的晚期;虫体运动
神经系统已发育且可以在蛋里头顺着其长轴进行移动;而在4折叠期时(第一次
细胞分裂后760分钟)
胚胎的咽部开始进行收缩抽动;而在第一次细胞分裂后800分钟由蛋中孵化。
幼虫期
后胚胎发育期由孵化后有食物提供刺激下启动,在有食物的情况下,细胞分裂持续且后胚胎发育开始于孵化后的三个小时,一般而言秀丽隐杆线虫经历四个阶段的幼虫期(L1、L2、L3、L4)后变成成体,许多在胚胎期即设置好的
内细胞团于这四个阶段的幼虫期以时间及空间规划几乎不变的模式进行分裂,而这也给予了秀丽隐杆线虫固定数量
细胞以及命定的细胞命运。而在胚胎期所产生的671个
细胞核中,其中有113个细胞会在后胚胎发育的过程会进行计划性细胞凋亡,而剩下的558个细胞中只有百分之十的细胞(雌雄间性有51个细胞,
雄性有55个细胞)是胚细胞且可以再进一步进行分裂。
倘若
胚胎孵化后没有食物的供应,这些刚孵化的
美国白灯蛾会停止继续发育并停留在这个阶段直到有食物提供为止,这些停止继续发育的幼虫细胞会停留在
细胞周期的G1期(停止生长)且无法进行分裂,这些停止继续发育的幼虫在没有食物供应的情况下约可存活六到十天。
在L2幼虫期的末期,如果环境状况不适合继续生长的话,秀丽隐杆线虫的幼虫可能会进入dauer幼虫阶段,这些不适合生长的环境状况包括受到环境费洛蒙影响、食物匮乏、高温等,会促使幼虫进入L2d的幼虫阶段,这个阶段幼虫同时具有可以继续进入L3幼虫期或dauer幼虫期的潜力,若环境逆境太强则进入dauer,若环境转好则进入L3
美国白灯蛾期,而dauer期为一个不会衰老的状态,因为dauer期的长短并不会影响dauer期后的虫体寿命。在取得食物供应后的一个小时内,dauer幼虫脱离dauer,二到三个小时之后开始进食,最后在十个小时后会蜕皮进入L4幼虫期。
成虫期
在22°C到25°C的环境下,大概在孵化后的45-50小时就会变成成熟的雌雄间性并产下他的第一个卵,成体雌雄间性大约可以产生四天的
卵细胞,在这段具有生殖力期间后的三到四天,成体会另外再存活十到十五天,自体
受精卵的雌雄间性会产生大约300个后代(因为精子的数目是有限的),但是如果和
雄性配种的话,雌雄间性会优先采用雄性的精子,此时后代数目可以增加到1200-1400个。雄性则在最后一次
美国白灯蛾蜕皮后的六天具有和雌雄间性交配的能力,且大概可以产生3000个后代。
科学价值
1、秀丽隠杆线虫以微生物为食,如大肠杆菌(
埃希氏菌属 coli),易于大量培养,每只成虫在生命周期里可产生约300只后代,适合作
遗传学研究。
2、培养秀丽隐杆线虫成本低,在实验室中容易掌控,并且可以在不用时冷冻,解冻之后仍能存活,因此适合长时间储存。
3、秀丽隐杆线虫身体透明,在研究
细胞分化及其他发育过程方面特别有贡献。每个体
细胞如何发育都有详细的记录,其细胞发育的命运在个体之间差异不大。秀丽隠杆
线虫是第一个基因体完全被定序的
多细胞生物。完成的基因体序列于1998年发表,虽然一小部分尚有缺失(该缺失最后于2002年十月完成)。秀丽隠杆线虫的基因体序列大约有一亿个
核苷酸碱基对,内含一万九千个以上的基因。在2003年,亲缘关系相近的线虫C. briggsae的基因体也被完整定序,使得研究人员得以相比对这两种生物的基因体。秀丽隠杆线虫有五对体染色体和一对
性染色体。
4、秀丽隐杆线虫
神经系统相对简单,于
雌雄同体之中,有302个
神经元,约7000个突触。
西德尼·布伦纳等人将秀丽隐杆线虫续列纵切,利用
电子显微镜得到的影像,重建其神经系统,并在1986年发表雌雄同体各个神经元之间如何连结,成为世界上第一个,也是目前唯一的神经网络体(英语:connectome)。2012年
雄性的身体后部神经系统也被重建,助于科学家了解
交配行为所需的神经系统结构。许多神经生物学家在此之后,利用秀丽隐杆线虫做为
模式生物,来了解其如何产生
趋化性,
趋温性,力传导及交配行为。
实验研究
自1965年起,科学家
西德尼·布伦纳利用
线虫作为
分子生物学和
发育生物学研究领域的模式生物。1974年悉尼·布伦纳提出以秀丽隐杆线虫做为模式生物,以研究发育生物学及
神经科学的重要课题。
太空研究
2003年2月,在
哥伦比亚号航天飞机的爆炸事故中,部分秀丽隠杆线虫的标本存活下来,立即成为新闻的焦点。
2009年11月17日,
美国航空航天局的“
亚特兰蒂斯号航天飞机”航天飞机将百万秀丽隐杆线虫送入了太空,旨在帮助
诺丁汉大学的专家进一步了解什么因素引起人体肌肉增强和萎缩。在
空间站上,这些
线虫将经历导致宇航员肌肉出现戏剧性萎缩的无重力状态。
瑟奇亚克将为其中一些秀丽隐杆线虫注入一种名为“RNAi”的物质,这种物质能够帮助降低肌肉消耗,它们的目的地空间站距离
地球大约200英里(约合322公里)。为了这次飞行,这些精挑细选的线虫已进入一种睡眠状态。它们被放入特制的细胞培养袋并进入太空,而后在食物的帮助下从睡眠中苏醒过来。进入太空之后,它们将暴露在
微重力环境下,时间为4天,而后接受冷冻,为重返地球做准备。回到
诺丁汉大学的实验室之后,科学家将对此次
航天对肌肉质量产生何种影响进行分析。
基因改造试验
2013年12月17日,美国研究人员调整了实验室
植物病原线虫——秀丽隐杆线虫的两个基因通路,使这种动物的寿命延长了5倍。他们表示,这项研究通过遗传相互作用得出的结果,让抗衰老疗法出现了令人期待的美好前景。这两个
基因突变启动延长寿命的特定组织的正反馈循环。从根本上说,这些蠕虫可以活到相当于400到500年的人类的寿命。
在研究中,科学家抑制影响
胰岛素活性和营养信号通路——雷帕霉素标靶的关键分子。雷帕霉素标靶通路的单一基因突变使秀丽隐杆线虫寿命延长30%,但胰岛素信号传递突变使它们的寿命增加一倍。如果同时使用这两个方面,它们的寿命可能延长130%,但它们结合起来的效果更大。
研究意义
细胞凋亡现象及其机理,最早是在
线虫中被揭示的。凋亡(apoptosis)是一个希腊文来源的词语,这个字眼表达的是花儿凋谢,树叶飘零的景色。“梧桐一叶落而知天下秋”、“搦兮秋风,
洞庭湖波兮木叶下”的
意象恐怕正是说的这种意境:优雅,含蓄,还带点淡淡的忧伤,更因为飘落时那种虽然有些无奈却坦然以受之的美。由于线虫研究开创了一个对今日
生物医学发展,具有举足轻重的全新领域,同时也因为以线虫为基础的凋亡研究对基础和应用生物学,产生的巨大推动作用,
卡罗林斯卡学院的
诺贝尔奖评选委员,会将年2002年生理和医学奖授予了,线虫生物学的开拓者:西德尼·布雷纳(Sydney Brenner)、约翰·萨尔斯顿(John Sulston)和线虫凋亡之父
罗伯特·霍维茨(Robert Horvitz)。
今天,秀丽线虫因其遗传背景清楚、个体结构简单、生活史短、
基因组测序完成等,在遗传与
发育生物学、行为与
神经科学、衰老与寿命、人类遗传性疾病、
病原体与生物机体的相互作用、
药物筛选、动物的应急反应、
环境生物学和信号传导等领域得到广泛应用。通过各国科学家的密切合作,
线虫研究的资源共享体系,为研究人员提供了极大的方便,如由NIH资助的线虫
种质中心(CGC)贮藏了大量的线虫品系,免费分发给世界各地的研究者,而AceDB系统为研究者提供了大量的有关线虫的信息,线虫的
脱氧核糖核酸序列可以在NCBI或Wormbase网站上进行在线比对。
研究历史
1900年,Maupas把这种棒状的
植物病原线虫命名为Rhabditis elegans,因为群体繁殖为“r-选择”的缘故,早在1948年Dougherty and Calhoun 便指出了它在
遗传学研究中的重要性。1952年,Osche把它置于Caenorhabditis
亚属,1955年Dougherty最终把它命名为Caenorhabditis elegans(其中Caeno意为 recent; rhabditis意为 rod; elegans意为nice)。广泛使用N2 Bristol品系,由Staniland从英格兰Bristol附近的蘑菇堆肥中分离,1965年被定为参考种N2。在此过程中,Dougherty建立了
线虫的
琼脂板接种,
大肠杆菌的培养方法和无菌单培养方法。对秀丽线虫的早期研究工作,主要集中在解剖、营养、生理和生殖等方面,直到1960s中期,随着
脱氧核糖核酸双螺旋结构的揭示和
遗传密码的发现,使得当时的生物学家认为,“人脑是生命科学研究的最后堡垒。”
1963年,Sydney Brenner在写给
剑桥大学分子生物学实验室主任Perutz的信中指出:“几乎所有的经典的分子生物学问题已经解决或在今后几十年内将得到解决,……今后分子生物学的任务,是深入的探讨生命科学的其它领域,特别是发育和
神经系统”。在此背景下,Brenner着手寻找一种具有生活周期短,个体小容易繁殖的
动物界,1963年10月,他从Dougherty实验室获得了
线虫Bristol品系,并对此开展不懈的研究。在早期的研究工作中,Brenner分离得到了一些营养突变体,他转而使用EMS处理线虫,首先获得一种短小矮胖的个体,被命名为dpy-1。
到1974年Brenner的论文The Genetics of Caenorhabditis elegans发表时,通过EMS诱变一共获得300多个线虫突变体,其中多数为隐性突变。突变表型涉及行为、运动和形态结构等方面,这些突变材料使得100多个基因得以
表征,并被定位于6个连锁群。秀丽线虫作为
模式生物的优越性也日渐显示,如通体透明,体
细胞数目恒定,特定细胞位置固定等,这使得它成为研究个体发生的良好材料。Sulston通过活体观察
线虫的胚胎发育和细胞迁移途径,于1983年完成线虫从
受精卵到成体的
细胞谱系,是
发育生物学史上具有里程碑性的发现,随后秀丽线虫在胚胎发育、性别决定、细胞凋亡、行为与
神经科学等方面研究中得到广泛应用。其中Brenner,Sulston和Horvitz因在线虫的遗传与发育方面的成就,获得2002年
诺贝尔生理学或医学奖。从1980年代中期开始的线虫
基因组测序工作,于1998年完成,同年Fire建立了线虫
核糖核酸干扰技术,该技术可以方便的沉默特定的基因,即通过反向
遗传学(reverse genetics)研究特定基因的功能,在生命科学的许多领域得到应用,2006年Fire和Mello因此而获得诺贝尔医学或生理学奖。