X-gal也称5-Bromo-4-chloro-3-indolyl β-D-galactopyranoside或5-Bromo-4-chloro-3-indolyl β-D-galactoside,X-Gal是β-
半乳糖酶(β-galactosidase)的显色底物,在β-半乳糖苷酶的
催化下会产生蓝色产物。常用于β-半乳糖苷酶的原位染色检测以及蓝白斑筛选。
X–gal是β–半乳糖苷酶(β–galactosidase)的底物,
水解后呈蓝色。基于这个特点,pUC系列载体
脱氧核糖核酸(或其他带有lacZ基因载体DNA)以lacZ 缺失
细胞为宿主进行转化时、或用
M13噬菌体载体DNA进行转染时,如果在平板培养基中加入X–gal和IPTG,由于β–
半乳糖苷酶的α–互补性,可以根据是否呈现白色菌落(或噬菌斑)而方便地挑选出
基因重组体。
首先把X-gal配制成20 mg/ml的二甲基甲胺(DMF)溶液(-20℃避光保存),然后在100 ml的
琼脂培养基中,加入200 μl的上述溶液、100 μl的IPTG(24 mg/ml)和100 μl的Amp(100 mg/ml),制作成X-gal、IPTG、Amp平板培养基。当
脱氧核糖核酸片段插入至pUC系列载体(或其他带有lacZ、Amp基因载体),然后转化至lacZ缺失
细胞中后,涂布上述的X–gal、IPTG、Amp平板培养基,可根据长出菌体的蓝白色,而方便地挑选出
基因重组体(白色为具有DNA插入片段的基因重组体)。