电压钳(
电压 clamp)又叫电压钳制或电压固定,是一种
电生理学实验方法,由Cole和Marmont设计,后经Hodgkin和Huxley改进并成功地应用于神经纤维
动作电位的研究。该技术通过插入神经细胞内的微
电极向细胞内补充电流,使得补充的电流量正好等于跨膜流出的反向离子流,即使细胞膜通透性发生改变,也能控制
膜电位的数值不变。电压钳能够记录输送的电流,从而研究膜通道的
电流电压关系。
其设计原理是根据离子作跨膜移动时形成了跨膜离子电流(I),而通透性即离子通过膜的难易程度,其膜
电阻(R)的
倒数,也就是膜电导(G)。因此,膜对某种离子通透性增大时,实际上时膜电阻变小,即膜对该离子的电导加大。根据
欧姆定律V=IR,即I=V/R=VG,所以,只要固定膜两侧
电压(V)时,测出的跨膜电流(I)的变化,就可作为膜电导变化的度量,即可了解膜通透性的改变情况。电压钳通过迭代地测量
膜电位,然后通过添加必要的电流将膜电位(电压)更改为所需值,从而使细胞膜“钳”在所需的恒定电压上。
电压钳装置(附件1)有两个微
电极插入
细胞,一个是测量膜电位的微电极Em,它通过高
阻抗前级
放大器(XI)检测膜电位(Em),并将信号输入反馈放大器(FBA);另一电极I’与FBA输出端相连,用作向细胞内注入电流,FBA的两个输入端中一个接受
电势Em的输入,另一个接受指 令电位(C),当两者电位
相等时输出电流为零,当两者出现差异时,FBA经电极I’输出向细胞内注入电流,该电流在膜两侧产生趋向于指令电位C的电位变化,如此构成一个使
膜电位始终等于指令电位C的反馈电路,此时记录的Im就可反映膜电导G的变化。其实Im就是经
电极I’注入的电流,后者在电压钳制期间精确地对抗通道电流而使膜电流保持恒定。
电压钳的缺点:电压钳技术目前主要用于巨大
细胞的全细胞电流研究,特别在
分子克隆的
卵母细胞表达电流的鉴定中发挥其它技术不能替代的作用。但也有其致命的弱点:
3、对体积小的细胞(如
哺乳纲中枢
神经元,直径在10-30μm之间)进行电压钳实验,技术上有更大的困难。由于
电极需插入
细胞,不得不将微电极的尖端做得很细,如此细的尖端致使电极
阻抗很大,常常是60~8OMΩ或120~150MΩ(取决于不同的充灌液)。这样大的电极阻抗不利于作细胞内
钳式电流表或电压钳记录时在短时间(0.1μs)内向细胞内注入电流,达到钳制膜电压或膜电流之目的。再者,在小细胞上插入的两根电极可产生
电容而降低测量电压电极的反应能力。