第二次反共高潮是抗日战争时期（1940年—1941年）中国国民党顽固派发动的第二次严重反共事件。在该事件中，国民党顽固派的罪行遭到全国人民的强烈反对，共产党的严正立场和所采取的措施得到全国人民的热烈拥护，最终国民党顽固派的第二次反共高潮被击退。

1940年10月19日，何应钦、白崇禧按蒋介石旨意发“皓电”，诬蔑八路军、新四军“破坏抗战”，强令黄河以南的八路军、新四军一个月内开到黄河以北，12月9日蒋介石又发手令，密令顾祝同“围剿”新四军。中共中央于1940年11月9日致电驳斥“皓电”，为顾全大局同意皖南新四军北移并要求解决国共悬案。1941年1月4日，叶挺、项英率9000余人转移，6日在泾县茂林遭顾祝同、上官云相部八万多人袭击，因项英受王明右倾路线影响，准备不足、部署不当，激战八昼夜后，除2000余人突围，大多壮烈牺牲，项英、周子昆被叛徒杀害，袁国平牺牲，叶挺谈判被扣押，蒋介石却宣布新四军为“叛军”。事变后，中共坚决斗争，不仅谴责中国国民党阴谋，还重建新四军，毛泽东发布命令任命新领导，提出十二条办法，周恩来在重庆抗议。全国人民、民主人士、海外华侨反对国民党，国际舆论也谴责蒋介石，苏联反对其破坏团结，美英照会蒋介石。在这种情况下，蒋介石在3月6日国民参政会第二次会议上“保证”不再“第二次国内革命战争”，第二次反共高潮被击退。

1941年1月6日，新四军北移部队共九千余人在达泾县茂林地区，遭国民党军袭击，造成震惊中外的“皖南事变”。事后，蒋介石于1月17日下令取消新四军番号，进攻江北新四军，诬蔑新四军为“叛军”，并声称要将叶挺交付军事法庭审判。至此，中国国民党第二次反共高潮达到了顶点，中国共产党被迫奋起还击。1月20日，中共中央军委发布重建新四军的命令，任命陈毅为代理军长，张云逸为副军长，刘少奇为政治委员，赖传珠为参谋长，邓子恢为政治部主任，重整并扩大新四军。1月22日，毛泽东以中共中央军委发言人名义发表谈话，驳斥对新四军的诬蔑，揭露国民党反共阴谋，要求取消1月17日反动命令，惩办祸首，释放叶挺，废除国民党一党专政，实行民主政治。以周恩来为首的南方局也在重庆展开各种抗议活动，揭发和抨击中国国民党的暴行。中国共产党的正义自卫立场得到了广大人民和海内外舆论的同情与支持，蒋介石集团在政治上陷入孤立。3月6日，蒋介石在国民参政会上不得不表示，以后不再进行“剿共”。至此，国民党顽固派发动的第二次反共高潮便告结束。