药,广泛分布于我国的东北,新疆,
云南省,
内蒙古自治区,
安徽省等地,《
神农本草经》把它列为上品称“此草最为众药之王,经方少有不用者”。甘草的成分复杂,主要含有三类,黄类,香豆精类化合物,其中黄酮类是从甘草提取物中得到的一类生物活性较强的成分,其药化学成分主要有甘草素,
异甘草素,甘草甙,异甘草甙,新甘草甙等。近年来,国内外都有关于甘草
黄酮的清除
自由基、抗氧化、抗促癌、抗致突的作用的报道。化学名称
豆科光
顾炳鑫Glycyrrhiza glabra L.根,甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.根。
甘草原料中的化学成分十分复杂,为获得较好的分离效果以及减少杂质对制备色谱柱的污染,同时提高目标物甘草甙在进样原料中的含量,本实验采取
萃取方法对原料进行前处理。用
电子天平称取4g干草放入
烧杯中,用量筒准确量取100mL蒸馏水倒入烧杯中溶解,超声15min左右,并不断用玻璃棒搅拌,加速溶解。然后将烧杯放入90℃恒温槽中加热2h后热过滤,将滤液加入正丁醇
溶剂后,静置数分钟后,大部分的
糖苷溶解
于正丁醇溶剂中,接着进行二次萃取,将残留在水中的少量的甙类萃取出来,最后将二次萃取得到的正丁醇溶液合并浓缩,待层析纯化。
取10mL上述
萃取后的产品作为备用的原料,启动泵,流速设置25mL/
min,由流动相(甲醇:水=1:4)将原料带入的制备柱内,根据出峰的情况收集干草甙产品的馏份:前1h的馏份作为前杂质馏份收集在一起,然后改变流动相比例用50%的甲醇和水的混合液冲洗柱子,每20min接一次产品,然后用旋转蒸发浓缩各瓶产品后,取20µL进行HPLC色谱分析,直到检测无目标物为止。选取高效液相色谱检测条件为:流动相:甲醇:;固定相:硅胶碳18;色谱柱:;流速:;检测波长:254nm对各瓶产品进行检测,得到每20min接一次的产品中,第二瓶甘草甙的含量最高。
由于经过一次层析纯化后甘草甙的含量不高,所以选取同样的方法,取10mL上述纯化后的产品作为备用的原料流速为,由流动相(
甲醇:水=2:5)将第二瓶产品带入层析柱内,根据出峰的情况收集干草甙产品的馏份:每4min接一次产品,然后用旋转蒸发浓缩各瓶产品后,利用上述相同的检测条进行色谱分析,直到检测无目标物为止。经分析发现,得到每4
min接一次的产品中,第6瓶甘草甙的含量最高,其中保留时间为5.898min为目标峰,经面积归一法计算含量达到40%左右。
将收集的产品在旋转蒸发器上
减压病蒸馏,温度为,待
溶剂基本全部被蒸出后,用少量的甲醇溶解圆底烧瓶上的固体产品后,并倒入试管中在室温条件下结晶,直到有白色的粒状
晶体出现。