红色
毛癣菌属(Trichophyton rubrum)是毛癣菌属下的一种人源的皮癣菌,引起常见的皮肤浅部真菌病,如手癣、
足癣、头癣等。它是引致东南亚地区及澳洲北部的原住民
体癣的真菌,且随着
越南战争的发展,由返回国家的军人及难民被带至世界各地。现时世界各地大部份皮癣的病源多是由红色毛癣菌引致的。该菌是一种局部性的皮癣,可用止痒杀菌的药物涂擦患处。红色毛癣菌是一个复杂的物种群,包括多个地理分布模式的形态类型,其中包括T. raubitschekii、T. gourvilii、T. megninii和T. soudanense等多个已被正式描述为不同分类单元的物种。
传统鉴别主要依据生理生化等方法,但红色毛
浅部真菌的菌落产红现象受培养基类型、pH、培养温度等因素的影响,我们应用PCR方法,以
微小卫星脱氧核糖核酸引物,对这2种癣菌的
基因组DNA进行扩增,可以在很短时间内把它们区分开来。
红色癣菌(T.rubidium)、A毛癣菌或B毛癣菌(T.A hodges或T.B hodges)、红色表皮癣菌(Epidermaphyton rubrum)、鲑肉色表皮癣菌(Epidermaphyton salmoneum) 。
生理生化等方法,但红色毛
浅部真菌的菌落产红现象受培养基类型、pH、培养温度等因素的影响,应用PCR方法,以
微小卫星脱氧核糖核酸引物,对这两种癣菌的
基因组DNA进行扩增,可以在很短时间内把它们区分开来。
实验菌株:本研究采用红色毛癣菌临床分离株23株。红色毛癣菌中11株来自
上海市地区,3株来自徐州地区,8株来自
重庆市地区,1株来自
广州市地区,表型中羊毛型、绒毛型16株,粉末、沟纹型6株,颗粒型1株;所有菌株均经
中国人民解放军第二军医大学第二附属医院真菌室作形态学及马铃薯葡萄糖
琼脂培养基、
尿素琼脂培养基鉴定。
主要试剂:DNA抽提缓冲液按文献配制,
氯化苄为上海试剂三厂产品,
TaqDNA聚合酶、PCR反应缓冲液、dNTPs为日本Takara公司产品。
脱氧核糖核酸制备:实验菌株于马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)平皿上28℃培养2周,无菌牙签刮取菌丝体,采用氯化法提取
基因组DNA。
PCR扩增:以
寡聚核苷酸重复序列(GACA)4、(GTG)5及M13中心序列(5′-GAGGGTGGCGGTTCT-3′)等3种引物,对抽提的基因组DNA进行扩增。PCR反应体积20μL,其中包括:2μL10×PCR反应缓冲液(其中含Mg?2mmol/L),1μLdNTPs(2.5mmol/L),2μL引物(10μmol/L),1μLDNA模板(50ng/μL),1Ur
TaqDNA聚合酶(5U/μL)。反应条件:①(GACA)4:起始变性94℃5min;94℃1min,退火47℃1min,延伸72℃1min,38个循环;72℃延伸5min。②M13中心序列及(GTG)5:起始变性94℃5min;94℃1min,退火50℃1min,延伸72℃80s,35个循环;72℃延伸6min。产物于1.2%
琼脂糖凝胶电泳3V/cm,1.5h,紫外灯下照相记录。
在
电泳凝胶上,可观察到3种引物扩增下红色毛癣菌呈现不同的带型。在(GACA)4作引物时,红色毛癣菌的主要扩增条带有3条,大小约1100bp、950bp、600bp左右,特征主条带为950bp、1050bp2条。特征条带的差距相当明显、直观。
对红色
毛癣菌属、
须癣毛癣菌、犬小孢子菌、絮状表皮癣菌的MIC值分别为0.0002%~0.0008%、0.0008%
红色毛癣菌是真菌毛癣菌属的一个菌种,也是一种最常见的致病菌,会感染皮肤和甲,很少累及胡须、头发或头皮。全球范围内皮肤真菌感染患者中最常分离到该真菌。足和甲是最常见的感染部位。可以侵犯皮肤、毛发、甲板及甲下组织,从而引起
足癣、
股癣、
甲癣等多种传染性
皮炎。
手癣主要是发生在
手掌和指间的
皮肤癣菌病感染;足癣主要是发生于足跖部及趾间的皮肤癣菌感染,俗称“脚气”。主要的致病菌是红色毛癣菌,顽固、难以根治、病程较长,一般呈慢性。手癣发病率低于足癣,可能与手部皮肤经常保持干燥有关。足癣是所有皮肤癣菌病中发病率最高的。
有手足癣的病人,要保持手足干燥,减少各种化学物质对手的损伤,避免穿不透气鞋袜或合成纤维衣服,在洗澡后彻底擦干腹股沟、足和趾间皮肤,在足和鞋内使用抗真菌粉剂,肥胖患者注意减肥等。
灰指甲主要是由红色
毛癣菌属和
须癣毛癣菌感染导致的,虽可采用口服、外用药物或手术治疗,但比较顽固、容易复发。
正面呈颗粒状或绒毛状,白色到浅黄色。背面呈
栗色或略带紫色,偶尔可呈褐色、橘黄色或无色。在马铃薯葡萄糖
琼脂或玉米葡萄糖琼脂,易产色素。
有隔菌丝。小
分生孢子[(2~3.5)um×(3~5.5)um]呈泪滴形,通常单个沿菌丝分布[不同于须癣毛癣菌的成簇分布大分生孢子[(4~8)μum×(40~60)μm]可大量、罕见或缺失,呈长形、较窄、薄壁,两侧壁平行(铅笔形),含4~10个
细胞。大分生孢子可直接在粗大菌丝末端形成,单个或成簇。典型特征是小分生孢子可直接在大分生孢子上产生。关节分生孢子易从菌丝和大分生孢子产生。与绒毛状形态菌落相比,颗粒状培养物具有更多大
分生孢子结构和更大、更圆的小分生孢子。