巴氏蚕白僵菌(Beauveria bassiana)是一种广谱性昆虫病原真菌,属于
子囊菌门、
肉座菌目、虫草菌科、
白僵菌属。该真菌主要进行无性繁殖,产生
分生孢子,也可进行
有性生殖并产生子实体,被鉴定为球孢
冬虫夏草。巴氏蚕白僵菌在世界范围内被广泛用于害虫
生物防治,包括
马尾松毛虫和
玉米螟等害虫。在中国,使用巴氏蚕白僵菌防治马尾松毛虫和玉米是国际上最大的害虫防治项目之一,取得了良好的害虫持续控制效果。此外,巴氏蚕白僵菌也能感染
春蚕等经济昆虫,感染家蚕
美国白灯蛾干燥后的尸体称为
僵蚕。巴氏蚕白僵菌还有祛风、镇惊等药用价值。近年来,由于加强防治,白僵菌对家蚕的感染大为减少,为解决僵蚕的药源问题,以
蚕蛹为原料,接入白僵菌,所得蚕蛹可代僵蚕用。巴氏蚕白僵菌在世界范围内也被用作生物杀虫剂,用于控制
白蚁、马、白粉虱、
蚜虫和各种
甲虫等害虫。此外,巴氏蚕白僵菌还被研究用于控制致病的
臭虫和传播
疟疾的蚊子。
简介
球孢白僵菌在分类上属于菌物界、
半知菌、
丝孢纲、
丛梗孢目、丛梗孢科、
白僵菌属。球孢白僵菌是国内外广泛用于害虫
生物防治的
杀虫脒真菌之一,被认为是最具开发潜力的一种昆虫病原真菌。球孢白僵菌高毒菌株在
棉铃虫美国白灯蛾体壁上短暂生长即形成入侵结构,而低毒菌株在幼虫体壁上产生细长的匍匐
菌丝,这些菌丝会从害虫体内吸收营养,最终导致害虫死亡。
寄生范围
球孢白僵菌寄生范围极广,主要
宿主昆虫有
鳞翅目、
鞘翅目、
膜翅目、
同翅目、
双翅目、
半翅目、
直翅目、
等翅目、
蓟马科、
脉翅目、
革翅目、
跳蚤、
螳螂、
蜚蠊目和
纺足目等15目149科521属707种。此外,球孢白僵菌还可以侵染
蛛形纲及
多足亚门等
节肢动物门中的
蜱螨目寄主6科27属13种。生产上多用于防治
松毛虫属、
红松蜂、松
尺蠖、
松梢斑螟、松小、
天牛、
女贞尺蛾、
玉米螟、
番薯象鼻虫、麦象、
棉红蜘蛛、
大豆食心虫、
菜粉蝶、马铃薯象甲、
桃蛀果蛾、板栗象甲、
地老虎、
金龟甲、蝼蛄、叩头虫、
叶甲、蝽、蝗、叶蜂、
大叶蝉科、蚊、蚁等害虫。在我国主要用来防治甘薯象甲、大豆食心虫、地老虎、玉米螟、
棉铃虫、
蛞蝓、稻黑尾叶蝉、
稻飞虱、
三化螟、稻苞虫类、茶树小黄
卷叶蛾、
茶黄毒蛾、
三叶草夜蛾、
甜菜象甲、油菜象甲、金龟甲、叶甲、油菜
尺蛾科、
马铃薯二十八星瓢虫、菜青虫、
甘蓝夜蛾、苹果蠹蛾、桃小、
天牛、
松毛虫属等害虫。
害虫防治应用
球孢白僵菌是广谱性
杀虫脒真菌,国内外研究人员利用球孢白僵菌防治
玉米螟、松毛虫、小蔗螟、盲椿、
谷象、
柑橘属红蜘蛛和
蚜虫等农林害虫。特别是对玉米螟和松毛虫的
生物防治,在国内已作为常规手段连年使用。由于球孢白僵菌能有效地控制虫口数量,同时不伤害其他
天敌昆虫和有益生物,完全符合
有害生物综合治理的宗旨,同时由于其容易大量生产,防治成本较有竞争力,因而其具有广泛的应用前景。
基础研究
球孢白僵菌作为模式的昆虫病原真菌,是真菌--昆虫互作研究的重要
模式种。
中国科学院上海生命科学研究院和
浙江大学的科学家在国际率先完成球孢白僵菌的
基因组研究,发现球孢白僵菌同
北虫草的进化关系非常近,但由于主要无性繁殖为主,导致两在基因组结构上存在显著差别。球孢
白僵菌基因组编码有大量的次级代谢基因簇(secondary metabolic gene
原子簇),与此相对应,球孢白僵菌能够合成非
核糖体多肽类的白僵菌素(beauvericin)、类白僵菌素(bassianolide,又称作球孢交)和白僵菌环三肽(beauverilide),以及苯类的卵孢霉素(
卵孢素)等。
生物合成机理及昆虫生物测定研究表明,白僵菌素、类白僵菌素和卵孢霉素等均具有
杀虫脒活性,其中卵孢霉素能够抑制昆虫的
细胞免疫及
体液免疫而促进白僵菌的感染杀虫过程。功能
基因组研究揭示了不同基因在
白僵菌感染致病及环境抗逆过程中的作用与功能;遗传改造研究通过过表达内源或外源基因,显著提高了球孢白僵菌的杀虫效率或环境抗逆能力。
发酵生产
球孢白僵菌在液体、固体
培养基上均能生长发育良好,并产生不同类型的孢子,分别为
芽生孢子(blastospores)和
分生孢子(conidia)。在液体培养条件下,球孢白僵菌产生芽生孢子。芽生孢子
细胞壁薄,抗逆性能差,容易失活。
在固体培养条件下,球孢白僵菌产生分生孢子,分生孢子细胞壁厚,通常条件下比芽生孢子更具有生物稳定性。球孢白僵菌分生孢子的表面具有粗糙的皱折,它是一种β-
胡萝卜醇的聚合物,能增强分生孢子对不良环境的抵抗力,而芽生孢子表面是光滑的,所以对不良环境的抵抗力就更差。因为球孢白僵菌分生孢子比
芽生孢子具有对环境更强的抵抗力,而且在对许多农林害虫的防治上是更为有效的侵染体,所以在应用上一般使用分生孢子。对于球孢白僵菌的发酵工艺,国内外许多工作者进行了长期不懈的探索,先后经历了液体深层发酵、固态发酵和液固两相发酵。
液体深层发酵
液体深层发酵(submerge
发酵, SmF)是指微生物在液态的
培养基中的发酵过程。对于球孢白僵菌来说,液态发酵主要产生的是芽生孢子和
菌丝。利用此方法生产的优点是生产便利,生物量大。工业生产上曾尝试利用液体发酵生产
芽生孢子,然而,研究表明芽生孢子活力低、不耐贮藏,难以应用于实际。于是有些研究者通过改变培养基配方、添加
微量元素和选育合适菌株等手段进行液体发酵条件下生产
分生孢子的研究。研究发现,
绿僵菌以及
白僵菌液生分生孢子的形成与培养基组成、微量元素和
维生素的关系密切。总之,由于液生分生孢子在产量、
毒力及贮藏期等方面仍存在至今无法解决的难题,以至无法应用于生产实际。
固态发酵
固态发酵(
固体 state
发酵, SSF)是指利用自然
底物做碳源及能源,或利用惰性底物做固体支持物,其体系
碘化钠或接近于无水的发酵过程。固体发酵是目前公认的获得真菌孢子的最好方法,不仅产量高,而且质量好。在固体发酵中得到的孢子特性明显好于那些来自液体深层发酵得到的
芽生孢子,它们对干旱条件更具抗性,而且在干燥的环境中更稳定。
固态发酵生产昆虫病原真菌的
分生孢子已在许多国家取得了很大的进步,人们利用固态发酵生产球孢白僵菌、
金龟子绿僵菌等重要昆虫病原真菌的分生孢子。分生孢子具有抗逆性好,活力强,易保存等优点;但缺点是生产周期长,容易造成
杂菌污染。多年来,固体发酵是球孢白僵菌工业生产采用的主要方式。我国研制和开发了球孢白僵菌固体发酵的多种方法,并得到了大量的应用。
最初国内主要以室内浅盘、室外大床式和
塑料袋培养等土法生产球孢白僵菌,这种方法以廉价的农副产品皮和谷壳为主要原料,无需复杂的设备,生产方法简单易行,且成本低,适于就地生产、就地使用,但生产周期长,污染率高,产品质量低下且不稳定,特别是产品粉碎、包装过程中生产车间粉尘浓度高,可引起操作工人的过敏反应。
后来针对以上存在的缺点进行了一系列改进,取得了突破性进展,并降低了成本。然而,这些生产工艺大多是基于传统的开放式固体浅盘发酵,不仅容易造成发酵中
杂菌污染,而且温度、湿度等培养条件难以控制,随气温变化的影响较大,生产的孢子粉在不同批次间的生理状态参差不齐,产品质量不一致,所以难以满足商品化生产和制剂加工需要。
液固两相发酵
昆虫病原真菌的侵染体既可以通过液体深层发酵来生产,也可以通过固态发酵来生产。因此,把两者结合起来的液固两相发酵是解决昆虫病原真菌生产难题最有效的方法。
液固两相发酵(
羧基液体丁腈橡胶固体 biphasic
发酵)对于昆虫病原真菌的生产来说是指首先通过液体发酵快速生产大量
菌丝或
芽生孢子,再接种到固体营养或惰性基质上进行固体发酵,使其产生最接近自然接种体形态的气生
分生孢子。它结合了液体深层发酵和固态发酵,充分发挥了两者的长处,又避免了两者的缺点。该方法克服了单纯液体发酵生产的芽生孢子环境稳定性差等缺点,最大限度地利用了固体表面上产生气生分生孢子的优点,同时缩短了菌丝生长周期,生产方法简便,原料易得,能耗成本低。因此被广泛用于昆虫病原真菌分生孢子的生产。